慢生型大豆根瘤菌GX201与固氮相关的putA、lrp基因的研究

该研究运用分子生物学方法，克隆并测定了慢生型大豆根瘤菌的putA、lrp基因序列，通过BLAST软件分析发现，lrp基因存在putA基因的上游且转录方向相反.将含有gus报告基因的转座子Tn5gusA5转座到以pLAFR3为载体的重组质粒pGXN300后，利用pLAFR3与pPHIJI质粒的不相容性建立了一套适合于慢生型大豆根瘤菌的转座子诱变体系，应用该体系诱变慢生型大豆根瘤菌GX201，成功地构建了putA、lrp基因的突变体GX20108和GX20120.根据已测定的慢生型大豆根瘤菌的putA、lrp基因序列，设计一对核苷酸引物，PCR扩增putA基因的调控调区，研究lrp基因与putA基因的相互作用机制，离体试验证明putA基因的启动子区存在一个与lrp基因相关蛋白结合区域.

慢生大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)聚羟丁酸合成酶基因(phbC)的克隆和序列测定

以苜蓿根瘤菌Rm10 2 1的 phaC基因突变体菌株Rm1114 4 (phaC ::Tn5 - 2 33)为受体菌 ,通过功能互补 ,成功地从构建的Bradyrhizobium japonicum USDA110基因文库中 ,筛查到能与Rm1114 4互补 ,使之恢复在以乙酰乙酸为唯一碳源的M9培养基 (M9-AA)平板上 5d形成明显可见菌落 ,以及在MOPS平板上形成粘液型菌落的表型的重组粘粒 pDC2 ;经证实 ,该粘粒带有 phbC基因 .完成了该基因的全序列测定并已在GenBank登记 ,登记号为AY0 775 80 .B .japonicumphbC基因由 180 3碱基对组成 ,GC含量 6 1.8% ,AT含量 38.2 % ;编码 6 0 0个氨基酸 ,Mr=6 6 .95× 10 3 .图 3表 3参 13

慢生型大豆根瘤菌染色体的16kbEcoRⅠDNA片段的亚克隆测序分析

亚克隆测序分析发现 ,在 Bradyrhizobium japonicum的 GX2 0 1菌株染色体的 1 6kb Eco R DNA区段上含有一个与 put A基因同源的基因的 ORF30 54( Open Reading Frame) .该基因 ORF长 30 54bp,在核苷酸水平上与已报道的 put A基因有 94 %一致性 .其推断性的编码产物在氨基酸水平上与 put A编码产物脯氨酸脱氢酶 ( Pro DH)有 95%一致性 .利用 Tn5gus A5诱变的方法获得了该同源基因的标记置换突变体 ,该突变体在液体培养基 ( YMA)中的生长速率比野生菌株慢